目的探讨结核DNA检测技术在县级医院条件下诊断结核病的准确性及实用性，并分析其在基层医疗单位推广应用的价值。方法选取2022年6月至2023年12月高县人民医院收治的疑似结核病患者150例，随机分为观察组和对照组，每组75例。对照组采用传统痰涂片及培养法进行诊断，观察组采用DNA检测技术进行诊断。对比两组检测方法的诊断效能；并进一步分析观察组中利福平耐药与非耐药患者的临床特征差异。结果观察组诊断结核病的敏感度、阴性预测值、准确度均高于对照组(均(P<0.05）)。此外，在观察组35例经培养确诊的患者中，利福平耐药者的痰液转阴时间、平均治疗周期均长于非耐药者，复发率高于非耐药者，痰液转阴率与治疗满意度低于非耐药者(均(P<0.05）)。结论结核DNA检测技术可显著提高县级医院结核病诊断效率，其同步快速的利福平耐药检测能力，对早期识别耐药患者、指导临床制定有效治疗方案具有重要意义，推荐在基层推广。